Soluciones Cromatográficas Conectadas
Catálogo Thermo Scientific de
Consumibles de Cromatografía 2019 / 2021
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CULTIVOS CELULARES:
Fundamentos y aplicaciones del cultivo in vitro de células animales y humanas
PROGRAMA ANALÍTICO
Parte teórica:
TEMA 1: ¿Qué es un cultivo celular? Generalidades sobre técnicas de cultivo de células animales. Historia del cultivo celular. Ventajas y desventajas de los cultivos celulares. Técnicas de cultivo de tejidos como alternativa a la experimentación con animales.
TEMA 2: Requisitos básicos para el cultivo celular. Infraestructura y equipamiento mínimo. El ambiente del cultivo celular. Niveles de seguridad. Trabajo en condiciones asépticas y métodos de esterilización y desinfección. Requerimientos físico-químicos de los cultivos celulares: temperatura, pH. Reactivos generales de uso en el cultivo celular. Medios de cultivo: composición, suplementos, sueros medios libres de suero.
TEMA 3: Terminología y descripción de los diferentes tipos y sistemas de cultivo celulares. Ciclo celular y curvas de crecimiento. Morfología y viabilidad celular. Métodos de detección y evaluación de la viabilidad celular. Mantenimiento de los cultivos y subcultivos. Criopreservación.
TEMA 4: Diferentes tipos de Cultivos primarios. Explantes. Disociación mecánica y enzimática de tejidos. Purificación de tipos celulares. Líneas celulares: finitas y continuas; origen y manejo de células. Organización de un servicio de Cultivos Celulares. Desarrollo y mantenimiento de cultivos celulares de diferentes orígenes.
TEMA 5:Líneas celulares: Iniciación de los cultivos. Parámetros típicos: adherencia para cultivos que se fijan a sustrato, tiempo de duplicación celular y curva de crecimiento. Estudios de citotoxicidad.
TEMA 6: Concepto de diferenciación y transformación celular. Obtención de líneas celulares tumorales. Producción de vacunas.
Parte práctica:
Trabajo práctico 1: Disociación celular por tripsinización de una línea celular de fibroblastos
Técnicas de trabajo en el Laboratorio de Cultivos celulares. Importancia de mantener un ambiente estéril y de las Buenas Prácticas de Laboratorio: Técnica aséptica en la práctica. Seguridad e Higiene. Limpieza de los equipos. Familiarización con el espacio de trabajo: Cabinas de Seguridad Biológica.
Trabajo práctico 2:Obtención de cultivo primario mediante el aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (peripheral blood mononuclear cells =PBMC)
Técnicas de trabajo para obtener cultivos primarios, reactivos específicos y equipamiento utilizado. Purificación de células inmunes por medio de gradientes de densidad. Evaluación de viabilidad celular.
Trabajo Práctico 3:Conteo, Plaqueo y tratamiento con drogas
Preparación de drogas a estudiar y uso de cultivos celulares para estudios de toxicidad. Recomendaciones sobre las dosis a usar en función de número de células / volúmenes de trabajo. Experimento de toxicidad celular. Conteo celular con cámara de Neubauer.
Trabajo Práctico 4:Determinación de la viabilidad de una línea celular expuesta a una droga
Ensayo de toxicidad. Evaluación de Viabilidad usando técnica de MTT. Determinaciones espectrofotométricas.
Evaluación final:
Examen final escrito; se evaluarán los conocimientos adquiridos en el curso.
Bibliografía recomendada:
YAMADA. Current Protocols on Cell Biology. John Wiley and Sons Eds, 2006
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